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什么是內(nèi)參？WesternBlot常用來比較不同條件下或不同細胞組織中目標蛋白表達量的相對多少，因此必須先確定上樣量相同，才有比較的基礎(chǔ)。在WesternBlot實驗中，可能因總蛋白濃度測定不準確，或是蛋白質(zhì)上樣時因操作產(chǎn)生誤差，所以必須設(shè)置內(nèi)部參照組來進行校正。此內(nèi)部參照必須在不同細胞或組織間表達相對恒定，且有高水平的表達量，來確保不同樣品間蛋白定量相同。而這樣的參照蛋白，就稱為內(nèi)參，對應(yīng)的抗體就稱為內(nèi)參抗體。內(nèi)參在WB實驗中的重要性1用于校正蛋白水平，確保不同樣品間蛋白定...

Q1:配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時能否有血清的存在？血清的存在會影響脂質(zhì)體的形成，建議配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時采用無血清培養(yǎng)基（一般推薦MEM培養(yǎng)基）。Q2:轉(zhuǎn)染試劑能否凍存？不能。本試劑一定要4℃保存，要注意避免反復(fù)多次長時間開蓋，長時間開蓋會導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。Q3:使用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑需要注意什么？1）細胞鋪板密度較高，以90%-95%為佳；2）使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率；3）制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑；4）轉(zhuǎn)染的時候...

導(dǎo)讀FastBlockingWestern（快速封閉液）是最新一代的即用型、高效快速Western封閉液。封閉時間僅需10分鐘，效果優(yōu)于脫脂奶粉、BSA、酪蛋白等傳統(tǒng)封閉液，簡化了Western實驗方案。該試劑不含有哺乳動物來源的蛋白成分，避免與抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。該試劑可與磷酸化的抗體以及NC膜和PVDF膜兼容。PART01封閉原理轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，需對轉(zhuǎn)印膜進行封閉。在轉(zhuǎn)印膜上未結(jié)合蛋白的位置，有許多非特異性的結(jié)合位點，為避免其與抗體發(fā)生非特異性結(jié)合引起高背景，需使用含有惰性蛋白...

1.Oligo（dT）Oligo(dT)是多聚胸腺嘧啶、T重復(fù)寡核苷酸，就是只有胸腺嘧啶組成的核苷酸鏈。因為Oligo(dT)與mRNA的Poly(A)尾巴可以發(fā)生特異性結(jié)合，所以用Oligo(dT)特異結(jié)合到mRNA上Poly(A)尾端，因此，主要用于逆轉(zhuǎn)帶有Poly(A)尾的mRNA。例如模板為真核生物來源，Oligo(dT)可與mRNA的3’Poly(A)尾配對，有利于長鏈或全長mRNA的逆轉(zhuǎn)錄。但是，其對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不允許其降解，否則全長cDNA合成量會...

mRNA疫苗相關(guān)產(chǎn)品-起發(fā)生物一、mRNA疫苗生產(chǎn)可分為兩大塊：mRNA制備和脂質(zhì)微粒進行包封mRNA疫苗生產(chǎn)可分為兩大塊，可以類比為“原料藥”（mRNA）的生產(chǎn)和純化，以及“制劑”（利用脂質(zhì)微粒進行包封）階段。原料藥（mRNA）生產(chǎn)涉及DNA原液制備和mRNA原液的制備，mRNA原液的制備（體外轉(zhuǎn)錄），是整個mRNA工藝流程中核心的步驟，而原料主要是酶。(一)mRNA疫苗的生產(chǎn)mRNA疫苗生產(chǎn)可分為兩大塊，原料藥（mRNA）的生產(chǎn)以及制劑（利用脂質(zhì)微粒進行包封）階段。mRN...

細胞培養(yǎng)技術(shù)創(chuàng)建于二十世紀初，歷經(jīng)一個多世紀的發(fā)展，現(xiàn)在已成為生命科學(xué)領(lǐng)域越來越重要的實驗技術(shù)之一。由于細胞的特殊性，在細胞培養(yǎng)過程中，或在細胞建株和建系過程中，隨著傳代次數(shù)的增加，細胞的各種生物特性都會逐漸發(fā)生變化。因此，原始細胞種子的及時保存就顯得尤為必要。在雜交瘤單抗的制備過程中，雜交瘤細胞以及克隆化得到的亞克隆細胞的凍存，是bi不可少的操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候，在細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異...